植物切片盧戈氏染色實(shí)驗步驟

1、脫水浸蠟：將樣品整理好放入脫水盒中。將脫水盒放進(jìn)脫水機內依次梯度酒精脫水。75%酒精4h，85%酒精2h，90%酒精2h，95%酒精2h，無(wú)水乙醇I 1h，無(wú)水乙醇II 1h，醇苯混合液5-10min，二甲苯I 5-10min，二甲苯II 5-10min，62℃蠟苯混合液2h，62℃融化石蠟I 4h，62℃融化石蠟II 4h。

2、石蠟包埋：將浸好蠟的組織轉移到包埋機上進(jìn)行包埋。先將少量融化石蠟加入包埋框，待蠟凝固之前將樣品從脫水盒內取出放入包埋框并貼上對應的標簽。于-20°凍臺冷卻，待蠟完全凝固后將蠟塊從包埋框中取出并修整蠟塊。

3、石蠟切片：將修整好的蠟塊夾到石蠟切片機切片上，切片厚度8-10μm進(jìn)行切片。蠟帶漂浮于攤片機40℃ 溫水上將組織攤平，然后用防脫載玻片將組織撈起，于60℃烘箱內烤片。水烤干蠟烤化后取出常溫保存備用。

4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min，二甲苯Ⅱ15min，無(wú)水乙醇Ⅰ5min，無(wú)水乙醇Ⅱ5min，85%酒精5min，75%酒精5min，蒸餾水洗。

5、盧戈氏染色：切片入盧戈氏染液浸泡染色，5min。自來(lái)水稍洗，洗去多余染液即可。然后依次進(jìn)入50%乙醇，70%乙醇，80%乙醇，無(wú)水乙醇三缸脫水。

6、透明封片：切片入干凈的二甲苯透明5min，中性樹(shù)膠封片。

7、數據采集：切片于顯微鏡下采集相關(guān)數據。