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脂肪組織透射電鏡取材實(shí)驗注意事項1、脂肪組織取材原則: 脂肪組織是電鏡實(shí)驗中比較難處理的一類(lèi)樣品,取材前,先查閱文獻,明確實(shí)驗目的,設計好實(shí)驗流程,熟悉組織結構及分布,對需要觀(guān)察的結構需要有組織學(xué)位置判斷。另外,戊二醛會(huì )影響抗原活性,如果課題需要做免疫性的實(shí)驗,取材時(shí)需要用不同的固定液固定。脂肪組織不灌注,直接取材。對取材用器材及試劑,進(jìn)行清潔及預冷,寫(xiě)好取材的標簽。取材時(shí),務(wù)必做到相同條件下取材,相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專(zhuān)用戊二醛,灌流固定選用3%多聚甲醛1%戊二醛。 2、取材器材與試劑: 冰盒、手術(shù)刀、手術(shù)剪、剃須刀片、EP管、2.5%戊二醛、蠟盤(pán)(光盤(pán)、載玻片均可)、封口膜、吸管、注射器。均4度預冷備用。 3、取材流程(不灌注取材): 3.1、取材基本要點(diǎn): 小:沒(méi)有方向的組織取材尺寸為1mm×1mm×1mm,有方向的組織為1mm×1mm×3mm為宜,3mm為長(cháng)軸的方向。因為固定液的穿透能力只有0.5mm,若樣品過(guò)大會(huì )使內部固定不良;樣品過(guò)小時(shí)觀(guān)察的目標將受到局限。 輕:取材刀片要鋒利,一般用剃須刀片,操作應始終貫徹動(dòng)作輕柔。只做直線(xiàn)切割,避免對組織的擠壓及拉鋸,以免引起人工損傷。 準:電鏡視野非常窄,所以取材的部位一定要準確可靠,根據研究目的要考慮到定位和定向的問(wèn)題。 冷:4℃操作、保存、送樣。盡量在低溫下操作,降低水解酶的活性,所用容器和器械應預冷,取好的標本放在4℃冰箱保存。 3.2、脂肪組織取材具體操作: 實(shí)驗動(dòng)物麻醉、灌流充分,然后用粗的剪刀將動(dòng)物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀剪開(kāi)胸腔,取出需要觀(guān)察的脂肪組織,用鋒利的刀片切下一塊脂肪組織置于滴有預冷固定液的蠟板上,切成1立方毫米小塊每組3-5塊(褐脂質(zhì)地同肌肉類(lèi)似,不需要特殊處理。白脂因為含有大量脂滴,會(huì )漂浮在固定液表面,且容易吸附在管壁上,較難處理)。最后用牙簽將組織塊逐一放入盛滿(mǎn)固定液的EP管中。用紗布將組織塊壓到液面以下。最后將樣品管放入4℃冰箱,固定2~4h后郵寄。郵寄時(shí)固定液充滿(mǎn)EP管,封口膜封口,氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸,冰袋2-3個(gè)(-20℃冰袋,多了會(huì )凍壞樣品),一定要與樣品隔開(kāi)。 |