植物組織透射電鏡取材實(shí)驗注意事項

1、植物組織取材原則：

  植物組織取材較為簡(jiǎn)單，取材前，先查閱文獻，明確實(shí)驗目的，設計好實(shí)驗流程，熟悉組織結構及分布，對需要觀(guān)察的結構需要有組織學(xué)位置判斷。另外，戊二醛會(huì )影響抗原活性，如果課題需要做免疫性的實(shí)驗，取材時(shí)需要用不同的固定液固定。固定液一般為2.5%電鏡專(zhuān)用戊二醛。

2、取材器材與試劑：

  冰盒、手術(shù)刀、手術(shù)剪、EP管、2.5%戊二醛、蠟盤(pán)（光盤(pán)、載玻片均可）、封口膜、吸管、注射器。均4度預冷備用。

3、取材流程：

  3.1、取材基本要點(diǎn)：

  小：沒(méi)有方向的組織取材尺寸為1mm×1mm×1mm，有方向的組織為1mm×1mm×3mm為宜，3mm為長(cháng)軸的方向。因為固定液的穿透能力只有0.5mm，若樣品過(guò)大會(huì )使內部固定不良；樣品過(guò)小時(shí)觀(guān)察的目標將受到局限。

  利：取材刀片要鋒利，一般用剃須刀片，操作應始終貫徹動(dòng)作輕柔。只做直線(xiàn)切割，避免對組織的擠壓及拉鋸，以免引起人工損傷。

  凈：野外取材時(shí)，要保證材料潔凈，PBS或者蒸餾水將材料沖洗感覺(jué)。一定要注意土壤、砂石的污染。會(huì )導致切片機鉆石刀的損壞。

  準：電鏡視野非常窄，所以取材的部位一定要準確可靠，根據研究目的要考慮到定位和定向的問(wèn)題。

  冷：4℃操作、保存、送樣。盡量在低溫下操作，降低水解酶的活性，所用容器和器械應預冷，取好的標本放在4℃冰箱保存。

  3.2、植物組織取材具體操作：

  植物實(shí)驗設計時(shí)，需要注意，太硬及太老的組織因為不進(jìn)行超薄切片而無(wú)法進(jìn)行電鏡視野，在實(shí)驗設計中盡量規避。盡量選擇幼嫩的葉片、根尖、果實(shí)等部位進(jìn)行實(shí)驗。取材時(shí)，先用蒸餾水或緩沖液將待測組織沖洗干凈，然后快速將需要實(shí)驗的組織塊切下或剪下，轉移到滴有戊二醛的蠟板上。然后將樣品切成1立方毫米小塊每組3-5塊。對于有方向性的組織，可以根據組織類(lèi)型切成截面1平方毫米，長(cháng)2-3毫米的長(cháng)條，方便組織定位。最后用牙簽將組織塊逐一放入盛滿(mǎn)固定液的EP管中。如果組織塊漂浮在固定液表面，真空泵抽氣直至樣品沉入頁(yè)面以下。如果還是會(huì )漂起來(lái)，可以用紗布將組織塊壓到液面以下。最后將樣品管放入4℃冰箱或冰盒，固定2～4h后郵寄。郵寄時(shí)固定液充滿(mǎn)EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸，冰袋2-3個(gè)（-20℃冰袋，多了會(huì )凍壞樣品），一定要與樣品隔開(kāi)。